一、操作室厭氧環境形成
1、按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內放入二個無毒塑料袋。
2、通電源開照明燈，開控溫儀，調節所需溫度及安全溫度。
3、操作室內放入1000g鈀粒（封閉）和500g干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）。
4、 關緊取樣室內外門，并抽真空校驗。
5、操作室內*次置換（氮氣置換）：
（1）先用橡皮管插入操作室內進氣口，另一頭插入塑料袋。
（2）接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使二只塑料袋充足氮氣，然后扎緊袋口。
（3）把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
（4）把塑料袋內氮氣漸漸地放于操作室內，至全部放出。
6、操作室第二次置換（氮氣置換）重復一次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關開閉排氣。
7、操作室第三次置換（混合氣體置換）：
（混合氣體配比為：N2 85%；H2 10%；CO2 5%）
（1）調換氣路打開混合氣道通閥門進氣，充氣時要隨時腳踏開關開閉排氣。
（2）混合氣充滿塑料袋后，關掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經過流量計輸入操作并調整流量計，流量為每分鐘10毫升左右。
（3）把塑料袋內混合氣漸漸排于操作室內。
（4）通過三次換氣后，操作室內氣體含氧量已處于極微量狀態。
8、操作室內打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一小時后打開美蘭指示劑（美蘭安瓶）觀察其變色情況，不變色為操作室內達到厭氧環境。
9、開紫外線滅菌燈，室內進行滅菌處理。滅菌時間自定。
二、菌種的置入和培養
1、檢查取樣室內門并關緊之。
2、打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關上外門。
3、 取樣室充氮置換三次過程：先抽真空度500毫米汞柱（66Kpa）以上停，然后人工打開氮氣閥門進氣，使指針回復零位后進行下次操作。
4、如選定真空度較低就需要增加置換的次數。
5、取樣室內外門開啟，關緊要抽低真空度100毫米汞柱（13 Kpa）檢驗及幫助操作。
（1)每天在操作室內打開美蘭指示劑觀察，正常情況下使用。如不正常就必須重新換氣。
（2）要長期連續輸入微量的混合氣體，使補進的氫氣能和微量的氧結合通過催化吸收，保證了室內厭氧狀態，補入混合氣流量選定為每分鐘10毫升左右。
（3）連續培養運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
7、接種棒滅菌器的應用：
（1）隨時用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進行殺菌（接種棒）。
（2）熔蠟處可直接放上，試管封蠟口旋轉熔蠟。
8、操作室里的培養箱內的溫度可任意選擇和控制。
9、混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調整：調節減壓閥，使輸出壓力為0.1Mpa左右。
